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一、CMC配製:CMC的濃度為3-4‰。在500ml燒杯中加入150ml水,在磁力攪拌器攪拌下慢慢加入1.75gCMC,促使其溶解,攪拌20min後,再加入350ml水,一直攪拌1h。抽濾得CMC溶液待用。
二、矽膠液配製:在研缽中加入約100ml上述CMC溶液,用研棒不斷攪拌下,慢慢加入矽膠GF254粉末(CMC水溶液的用量大約是矽膠質量的2-3倍之間),直至感到液體變得較粘稠狀,且用研棒蘸取矽膠液可見粘絲狀即可。切記不能馬上就開始鋪板,需要將其再放置約十幾分鍾,以使矽膠粉末能夠充分吸收水分溶脹,過早鋪板,將會造成矽膠板起泡、起鼓或起楞等。
三、鋪板:用藥勺取適量矽膠液置於玻璃板上,並用藥勺大致均勻地攤開,尤其四個角及邊緣鋪滿,然後將該玻璃板在桌麵上做上下地且幅度要大些顛動幾次即可。
四、幹燥:自然晾幹十幾小時。
五、活化:放在恒溫幹燥箱裏於105-110℃幹燥30min,然後冷卻室溫,取出存放在幹燥器保存,待用。
薄層色譜點樣應注意的問題:
1.點樣量:原點位置對樣品容積的負荷量有限,體積不宜太大,一般為 0.5~10μl,樣品的濃度通常為0.5~2mg,太濃時展開劑從原點外圍繞行而不是通過整個原點把它帶動向前,使斑點脫尾或重疊,降低分離效率。點樣量太小,不能檢出清晰的斑點影響判斷。點樣量太多,展開劑不能全部負載,容易產生脫尾現象。當點樣量適合時,可采用點狀點樣;當點樣量過大,原點無法負荷時,可采用條帶狀點樣,得到更好的分離效果,提高分辨率。
2.樣品的溶劑:樣品在溶劑中溶解度很大,原點將變成空心圓,影響隨後的線性展開,所以原則上應選擇對被測成分可以溶解但溶解度不是很大的溶劑。供試液的溶劑在原點殘留會改變展開的選擇性,親水性溶劑殘留在原點吸收大氣中的水分(特別在高濕度環境)對色譜質量也會產生影響,因此除去原點殘存溶劑是必要的,但對遇熱不穩定和易揮發的成分,應避免高溫加熱,以免成分被破壞或損失。