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薄層色譜法的操作方法包括薄層色譜矽膠板的選用、點樣、展開、顯色、檢視與記錄五個步驟。同時,在使用過程中,經常會遇到拖尾、邊緣效應、S形及波形斑點、念珠狀斑點及Rf值不穩定等問題。
薄層板的選用:
目前,實驗室已普遍采用市售高效薄層板,以矽膠G型板最為常見,相對於自製薄層板來說分離效果更好。由於矽膠表麵的pH值約為5,比較適合於酸性和中性物質的分離,如有機酸、酚類、醛類等。堿性物質能與矽膠作用,展開時易被吸附於原點不動或出現斑點拖尾現象。在自製薄層板時可用稀堿溶液製備薄層使其變為堿性,或用堿性展開劑展開,從而得到理想的圖譜。
對薄層板的質量要求:厚度均勻一致、表麵平整光滑、無麻點氣泡、無破損汙染。自製薄層板時,要控製好鋪板用的勻漿稠度,過稠則板麵容易出現層紋,過稀則幹後表麵粗糙;使用前一般應於110℃下活化30 min,活化後置幹燥器中備用。市售板在陰涼幹燥處保存,可直接使用。
Rf值不穩定的各因素:
1.溫濕度
溫濕度不穩定。層析時室溫差控製在5℃之間。其他條件相同,溫度低比溫度高展開慢,分離好。濕度可能主要影響薄層板的吸附能力,導致選擇性( 容量因子) 的變化。濕度應根據實際情況確定,可通過反複實驗進行相應的調整。一般來說,濕度較低時,分離效果較好。
2.展開劑
展開劑的極性越大,對待定化合物的洗脫能力也越大。
3.薄層厚度
板厚度變化對比移值影響明顯。厚度達0.2mm時,影響較小;在0.25mm,分離效果最佳。
4.吸附劑含水量
與吸附劑的種類、使用時的加水量、風幹時間、活化溫度、活化時間等因素有關。
5.層析缸中蒸汽
缸中蒸汽未達飽和時,比移值不能重現。為使缸中蒸汽飽和,可以在缸內壁附上一層濾紙,讓展開劑全部濕潤;把展開劑放入層析缸一段時間後再放薄層板;盡可能在恒定溫度下層析。
6.其他因素
展開劑的pH、展開時間、展開距離、樣品濃度、點樣量、薄層板所用吸附劑中的粘合劑的種類和用量等。
煙台黄瓜视频app下载污安卓化工產品有限公司,主要從事層析耗材的生產及銷售,產品包括,柱層層析矽膠粉、薄層色譜矽膠板、薄層色譜矽膠製備板等,經過近10年的摸索,黄瓜视频app下载污安卓生產的矽膠粉無論在產能還是質量方麵都一直處於國內領先水平,並且在客戶中享有極高的聲譽。